支原体(培养法)记录

检定方法：直接接种法。见《支原体检查（培养法）程序》SOP-ZL005-00 第一部分 设备／用具

仪器设备名称 生物安全柜 35～37℃孵箱 灭菌用具名称 1ml刻度吸管 10ml刻度吸管 1ml刻度吸管 10ml刻度吸管 第二部分 材料/试剂

名 称 支原体肉汤培养基 支原体半流体培养基 灭活小牛血清 无菌生理盐水 75%酒精棉

第三部分 程序

数量/规格 批号/制备日期 有效期（至） 数量（支） 接种用 转种用 状 态 灭菌日期 有效期（至） 编 号 是否状态良好 是□ 否□ 是□ 否□ 确认人

序 号 操作步骤 1.1在准备间将支原体半流体培养基放入不锈钢锅内，用电磁炉水浴加热10～15分钟，使其完全溶解。 操作人 复核人 试验日期 1 准备 1.2进入操作间。房间号： #。 1.3 紫外光灯照射 分钟，生物安全柜启动____分钟。 2 补加 灭活小 牛血清 每支支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基中各加入 __ ml灭活小牛血清（培养基：血清为8:2）。 3.1吸取供试品接种支原体肉汤培养基4支，每支___ ml。 3供试 另吸取供试品接种支原体半流体培养基4支，每支__ ml。 品接种 3.2吸取无菌0.9%NaCl接种支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基各4支，每支 ml，作为阴性对照。 4孵化培养 4.1将接种供试品和对照品的培养基中管置入35～37℃孵箱。 4.2 每隔3天观察1次，直接培养21天。记录在表1。 Ⅰ.初次接种培养 表1 供试品、阴性对照观察结果

直接培养21天，每隔3天观察1次结果 培养基 培养基名称 数量 初次 3 6 9 12 15 18 21 结果 供试品/阴性对照 1 2 3 4 1 2 3 4 3 4 3 4 3 4 3 4 3 4 判定 肉汤 半流体 肉汤 半流体 4 4 4 4 （注：合格用“—” 表示，不合格用“+” 表示。） 观察人： 复核人： _ Ⅱ.转种培养 转种日期： 年 月 日 序号 1 准备 操作步骤 1.1在准备间将支原体半流体培养基放入不锈钢锅内，用电磁炉水浴加热10～15分钟，使其完全溶解。 操作人 复核人

1.2 紫外光灯照射 分钟，生物安全柜启动____ __ 分钟。 2.1于初次接种后的第七天，每种培养基各从4支中取第1和第2支转种，每一支培养基转种支原体半流体培养基及支原体肉汤2转种 培养基（已加灭活小牛血清）各2支，每支接种 ml。 2.2吸取无菌0.9%NaCl接种支原体半流体培养基和支原体肉汤培养基各4支，每支 ml，作为阴性对照。 3培养 3.1将接种上供试品和对照品的培养基中管置入35～37℃孵箱。 3.2每隔3天观察1次，直接培养21天。记录在表2。 表2 转种培养基及阴性对照结果观察

供试品/阴性对照 肉汤 转种1 半流体 肉汤 转种2 半流体 阴性 肉汤 转种培养21天，每隔3天观察1次结果 培养基 名称 3 6 9 12 15 18 21 结果判定 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 对照 半流体 （注：合格用“—” 表示，不合格用“+” 表示。）

观察人：_____________ 复核人：___________ Ⅲ.结果判定标准

1 接种、转种了供试品的培养基及阴性对照应均无支原体生长，判为合格。

2 如有支原体生长，可加倍量供试品复试。如复试均无支原体生长，供试品判为合格。如 有支原体生长，供试品判为不合格。

结 论： 判定日期： _ 判定人： 复 核 人：_ __