３６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｖｏ１．３３ Ｎｏ．６ ２０１４ 一次性反应微量板与９６孑Ｌ Ｖ型微量反应板的实验对照 曾红平，张群先，罗艳玉 （织金县农牧局，贵州织金５５２１Ｏ０） ［中图分类号］ Ｓ ８５４．４［文献标识码］ｃ ［文章编号］１００４—６７０４（２０１４）０６—００３６一Ｏ１ 近年来，随着养殖业的不断发展，集约化、规模 化养殖场逐渐增多，畜禽饲养量也不断增大，为防止 疫情发生，降低养殖风险，提高养殖效益，免疫工作 显得尤为重要，免疫抗体的判定也应进一步加强。 为了更准确地知道养鸡场鸡群的抗体水平是否能达 到保护鸡群的目的，笔者通过用一次性反应板与９６ 孔Ｖ型微量反应板对一鸡场鸡群进行了禽流感血 凝试验对照实验，现将结果报道如下，供参考。 １ 溶液配制 １．１ 材料 一次性反应板、９６孔Ｖ型微量反应板，微量移 液器（配有滴头） １．２阿氏液的配制 葡萄糖２．０５ ｇ，柠檬酸钠０．８ ｇ，柠檬酸０．０５５ ｇ，氯化钠０．４２ ｇ，加蒸馏水至１００ ｍＬ，散热溶解后 调ｐＨ至６．１，６９ ｋＰａ １５ ｍｉｎ高压灭菌。 １．３ ＰＨ７．２、０．０１ ｔｏｏＬ ＰＢＳ的配制 ２５×ＰＢＳ配制：称量２．７４ ｇ磷酸氢二钠和０．７９ ｇ磷酸二氢钠加蒸馏水至１００ ｍＬ。 １×ＰＢＳ配制：量取４０ ｍＬ ２５×ＰＢ，加人８．５ ｇ 氯化钠，加蒸馏水至１０００ ｍＬ。 用氢氧化钠或盐酸调ｐＨ至７．２，灭菌。 １．４ １ 鸡红细胞悬液 采集３只无禽流感和鸡新城疫抗体的健康公鸡 的血液与等体积阿氏液混合，用ｐＨ７．２、０．０１ ｍｏＬ ＰＢＳ液洗涤３次，每次均以１ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ， 洗涤后用ＰＢＳ配成体积分数为１％鸡红细胞悬液。 １．５高致病性禽流感抗原 抗原的生产产家是青岛易邦，生产批号２０１２００３。 ２操作方法 ２．１ ９６孔Ｖ型微量反应板 在微量反应板的１孑Ｌ～１２孑Ｌ均加入２５“Ｌ ＰＢＳ，换滴头。吸取２５ Ｌ病毒悬液（抗原）加入第１ 孔，混匀。从第１孔吸取２５ Ｌ病毒悬液加入第２ ［收稿日期］２０１４—０４—２５ ［作者简介］曾红平（１９７６一），女，贵州务川人，本科，兽医师，主 要从事动物疫病预防控制工作。 孔，混匀后吸取２５ Ｌ加入第３孔，如此进行对倍稀 释至第１１孔，从第１１孑Ｌ吸取２５ Ｌ弃之，换滴头。 在更换滴头后，每孔加入２５ Ｌ ＰＢＳ，然后每孔 均加入２５ Ｌ体积分数为１ 鸡红细胞悬液（将鸡 红细胞悬液充分摇匀后加入）。振荡混匀，在室温 （２０￣２５℃）下静置４０ ｍｉｎ后观察结果。对照孔红 细胞成明显的钮扣状沉到孔底。 结果判定：把板倾斜，第１Ｏ孔完全血凝（不流 淌），则抗原稀释倍数为１：２５６。 ２．２一次性微量反应板（血凝板） 在微量反应板的１孔～１２孔均加入２５ Ｌ ＰＢＳ，换滴头。吸取２５ Ｌ病毒悬液（抗原）加入第１ 孔，混匀。从第１孔吸取２５“Ｌ病毒悬液加入第２ 孔，混匀后吸取２５肚Ｌ加入第３孔，如此进行对倍稀 释至第１１孔，从第１１孔吸取２５ Ｌ弃之，换滴头。 在更换滴头后，每孔再加人２５ Ｌ ＰＢＳ，然后每 孔均加入２５肚Ｌ体积分数为１ 鸡红细胞悬液（将 鸡红细胞悬液充分摇匀后加入）。振荡混匀，在室温 （２０￣２５℃）下静置４０ ｍｉｎ后观察结果。对照孔红 细胞成明显的钮扣状沉到孔底。 结果判定：把板倾斜，第１１孔完全血凝（不流 淌），则抗原稀释倍数为１：５１２。 ３结果分析 不同类型反应板做出的血凝效价不同。用Ｖ 型反应板做禽流感血凝试验，第ｌＯ孔完全血凝（不 流淌），抗原稀释倍数为１：２５６；用一次性反应板做 禽流感血凝试验，第１１孔完全血凝（不流淌），抗原 稀释倍数为１：５１２。 通过用不同类型反应板做禽流感血凝试验，并 对结果进行比较，Ｖ型反应板做出的禽流感血凝效 价比一次性反应板做出的禽流感血凝效价低一个滴 度。从结果可知，如果禽流感血凝实验相差一个滴 度，抗原稀释倍数相差一倍，血凝抑制结果也会相对 受影响，最主要是对鸡群的免疫抗体会判断错。总 之，做禽流感血凝试验时，选用Ｖ型反应板，能更准 确地判断鸡群的禽流感免疫抗体，更准确地知道鸡 群的抗体水平是否能够达到保护鸡群的目的。