实用医学杂志２０１３年第２９卷第２期 １７７ ｍｉＲ一３７５在子宫内膜癌ＨＥＣ一１－Ｂ细胞中的生物学功能 叶文蔚李甫钥 叶夏斌郑飞云 摘要 目的：探讨ｍｉＲ一３７５在Ⅱ型子宫内膜癌中的表达及对ＨＥＣ一１一Ｂ细胞增殖、凋亡的影响。方法： ｍｉＲＮＡ芯片分析Ⅱ型子宫内膜癌ｍｉＲＮＡ表达谱。利用ｌｉｐ０ｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００转染ＨＥＣ．１．Ｂ细胞。实时荧光定量 ＰＣＲ检测转染后ｍｉＲ一３７５的表达。ＣＣＫ一８检测转染后细胞增殖能力的改变。流式细胞仪检测细胞转染效率 及转染后细胞凋亡情况。结果：ｍｉＲ一３７５在Ⅱ型子宫内膜癌组织中低表达。转染效率达７３．４３％ 转染后实 验组ｍｉＲ一３７５表达量较Ｎｃ组和对照组明显增加（Ｐ＜０．０５）。实验组较Ｎｃ组生长明显受抑（Ｐ＜０．０５）。实验 组较ＮＣ组、对照组凋亡明显增加（Ｐ＜０．０５）。结论：初步证明ｍｉＲ一３７５抑制Ⅱ型子宫内膜癌细胞增殖并促 进凋亡，可能成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的靶点 关键词ｍｉＲ．３７５；ＨＥＣ．１．Ｂ细胞； 增殖： 凋亡 Ｔｈｅ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ－３７５ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ＨＥＣ－１．Ｂ ｃｅｌｌｓ ＹＥ Ｗｅｎ ｗｅｉ，ＬＩ Ｆｕ—ｙａｏ．ＹＥ Ｘｉａ—ｂｉｎ，ＺＨＥＮＧ Ｆｅｉ—ｙｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ Ｆｉｒｓｔ Ａｆｉｆｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｗｅｎｚｈｏｕ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｗｅｎｚｈｏｕ ３２５０００，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：ＺＨＥＮＧ Ｆｅｉ．ｙｕｎ Ｅ—ｍａｉＺ：ｚｆｙ５７１０＠１６３．ｃｏｎ 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ一３７５ ｉｎ ｔｙｐｅ ｌＩ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ＨＥＣ一１－Ｂ ｃｅｌｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ｍｉＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｙｐｅⅡｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｍｉＲＮＡ ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ．ｍｉＲ－３７５ ｍｉｍｉｃｓ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｉｎｔｏ ＨＥＣ．１．Ｂ ｃｅｌｌｓ ｂｙ １ｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００，ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ一３７５ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｒｅａ１．ｔｉｍｅ ＰＣＲ．Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｖ ＣＣＫ一８，ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ＭｉＲ一３７５ Ｗａｓ ｄｏＷｎ— ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｔｙｐｅ ＩＩ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ．ａｎｄ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｅｆｉｆｃｉｅｎｃｙ ｗａｓ ７３．４３％． Ｉ ｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｍｉＲ．３７５ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ＮＣ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）． Ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈａｔ ｉｎ ＮＣ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｍｉＲ－３７５ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｂｙ ＣＣＫ一８ （Ｐ＜０．０５）．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｒａｔｅ（Ｐ＜０．０５）ｂｅｔｗｅｅｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＮＣ ｇｒｏｕｐ，ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＭｉＲ一３７５ ｍｉｇｈｔ ｉｎｈｉｂｉｔ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ１ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｃｅｌｌｓ，ｗｈｉｃｈ ｍａｙ ｂｅ ｔｈｅ ｎｅｗ ｔａｒｇｅｔ ｏｆ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｔｙｐｅ ＩＩ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】 ＭｉＲ一３７５；ＨＥＣ一１一Ｂ ｃｅｌｌｓ；Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ； Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ 子宫内膜癌发病率逐年升高。在部分国家已 ｍｉＲＮＡ的异常表达可通过抑制抑癌基因或激活癌 成为女性生殖道最常见的肿瘤…。其总的五年生存 基因来启动癌变过程［ 。对未来肿瘤的治疗可能产 率约８０％。手术是最关键有效的治疗方法。Ⅱ型子 生革命性影响，成为近年来研究的热点。但是有关 宫内膜癌，侵袭性及转移率高，生存率低，预后 ｍｉＲＮＡ在子宫内膜癌中的表达及功能，研究甚少。 差＿２］，对于这类患者，寻求手术以外的治疗方法成 尤其对于Ⅱ型子宫内膜癌ｍｉＲＮＡ的功能研究将为 为肿瘤治疗的新热点。ｍｉＲＮＡ是一类长度约２０～ 其治疗带来新途径、新希望。我们通过之前的研究 ２３个寡核苷酸的非编码小ＲＮＡ，通过与信使ＲＮＡ 已发现ｍｉＲ一３７５在Ⅱ型子宫内膜癌中呈低表达 （ｍＲＮＡ）３ ＵＴＲ区域完全或不完全互补结合，在翻 本文旨在进一步研究ｍｉＲ．３７５在Ⅱ型子宫内膜癌 译水平上特异性调控ｍＲＮＡ的表达［ 。近年来。研 中的抑癌作用，初步证实ｍｉＲ一３７５为Ⅱ型子宫内 究表明ｍｉＲＮＡ参与了多种肿瘤的形成和发展（淋 膜癌基因治疗的潜在靶点。 巴瘤、胃癌、前列腺癌、胰腺癌等多种肿瘤）［ 。 １材料与方法 １．１ 主要材料与试剂ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（简称 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—５７２５．２０１３．０２．００５ Ｌｉｐｏ２０００）、Ｔｒｉｚｏｌ、凋亡试剂盒、ｍｉＲＮＡ ｃＤＮＡ逆转 基金项目：浙江省自然科学基金一般项目（编号：Ｙ２０９０６９９） 录试剂盒、Ｏｐｔｉ．ＭＥＭ Ｉ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）．ＤＭＥＭ培养液 作者单位：３２５０００温州医学院附属第一医院妇科 （ＧＩＢＣＯ）。ＳＹＢＲ ＧＲＥＥＮ（ＴＯＹＯＢＯ），ＣＣＫ．８（碧云 通信作者：郑飞云Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｙ５７１０＠１６３．ＣＯＢ 天生物技术研究所），Ｈｓａ—ｍｉＲ一３７５ ｍｉｍｉｃｓ、ｍｉＲＮＡ ｌ７８ 实用医学杂志２０１３年第２９卷第２期 阴性对照（Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｃｏｎｔｒｏ１）及ＦＡＭ标记的转染对 照（上海吉玛）。 １．２方法 认为有统计学差异。 ２结果 １．２．１ ｍｉＲＮＡ表达谱分析标本取自临床手术治 疗后病理及免疫组化确诊为Ⅱ型子宫内膜癌的病 ２．１ ｍｉＲＮＡ谱筛查结果 Ⅱ型子宫内膜癌组织 ｍｉＲＮＡ谱筛查发现．ｍｉＲ一３７５在Ⅱ型子宫内膜癌中 较正常子宫内膜呈低表达，存在显著差异（Ｒａｔｉｏ＞ ２．０，Ｐ＜０．０５）。 例。正常内膜取自因子宫肌瘤行子宫切除的病例， 术后病理证实无子宫内膜病变。送至北京博奥公 ２．２转染效率Ｆａｍ．Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ转染后 司完成。以Ｐ＜０．０５为有统计学意义，比值＞２．０为 显著表达差异。 １．２．２细胞培养及转染ＨＥＣ １一Ｂ细胞购自上海 中科院细胞库，用含１０％胎牛血清的ＤＭＥＭ培养 液培养。ＨＥＣ．１．Ｂ细胞分实验组（ｍｉＲ一３７５ ｍｉｍｉｃｓ 转染组）、ＮＣ组（ｍｉＲＮＡ阴性对照转染组），对照组 （常规培养细胞），转染终浓度５０ ｎｍｏｌ／Ｌ。转染前 ２４ ｈ按３ Ｘ １０ｓ／孔密度接种６孔板，３７℃培养过夜 后按照Ｌｉｐｏ ２０００说明书进行转染，不再详述。转 染完成后继续培养进行后续实验。 １．２．３ 转染效率检测 转染ＦＡＭ．Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ Ｃｏｎｔｒｏｌ ２４ ｈ后，取约１ Ｘ １０ 个细胞，ＰＢＳ洗涤后重 悬．立即避光行流式细胞仪检测。 １．２．４实时荧光定量ＰＣＲ检测ｍｉＲ一３７５的表达 转染４８ ｈ后，用Ｔｒｉｚｏｌ试剂法提取总ＲＮＡ。Ａ２６０／ Ａ２８０为１．８～２．０之间方可用于检测。取５００ｎｇ总 ＲＮＡ做逆转录反应。试剂盒提供ＲＴ及ｑＰＣＲ通用 引物，操作步骤按试剂盒说明书进行。反应总体积 为１０ Ｌ，包含ｃＤＮＡ模板１ ｔｘＬ（１：１０稀释）、ｑＰＣＲ 通用引物１ ｔｘＬ、ｍｉＲ．３７５特异性的上游引物１ ｔｘＬ （５ 一１－ＩＴＩ、Ｇ１ＴｒＣＧｒｒＩ１ＣＧＧＣＴＣＧＣＧＴＧＡ一３ 上海生工）、 ＳＹＢＲ—ＧＲＥＥＮ Ｍｉｘ ５ Ｌ、ｄｄＨ２Ｏ ２［ｚＬ。反应条件： ９５￣Ｃ变性３ ｍｉｎ，９５￣Ｃ作用５ ｓ，６２℃作用３５ ｓ，共４０ 个循环。以Ｕ６为内参照，上游引物序列为：５ ． ＣＧＣＡＡＧＧＡＴＧＡＣＡＣＧＣＡＡＡ１ＴｒＣ．３ 。结果分析采用 ２－△ 方法．以此值表示ｍｉＲ一３７５的表达水平。 １．２．５ ＣＣＫ一８检测细胞增殖将ＨＥＣ一１．Ｂ细胞按 ２．５ Ｘ １０ ／ＴＬ接种于９６孔培养板（１００ ＩｘＬ／￣Ｌ），每 组设４个复孔，２４ ｈ后转染。转染后４８ ｈ每孔加入 ｌ０ ＩＬＬ ＣＣＫ．８试剂，至培养箱孵育１—２ ｈ，测定 Ａ４５０值，以此反应细胞增殖情况。 １．２．６流式细胞仪检测细胞凋亡各组转染后７２ ｈ。 制备单细胞悬液。调整细胞密度为ｌ×１０ ／ｍＬ． ＰＢＳ洗涤、离心２遍，加缓冲液重悬细胞。按照 ＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ试剂盒说明书染色后分析细胞凋亡 情况。 １．２．７统计学处理统计软件采用ＳＰＳＳ １７．０版 本。数据结果以均数４－标准差的方式显示，多组间 均数比较采用单因素方差分析（ＡＮＯＶＡ），Ｐ＜０．０５ ２４ ｈ流式细胞仪检测转染效率为７３．４３％（图１）。 注：Ｍ１为转染ＦＡＭ—ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｃｏｎｔｒｏｌ后流式细胞仪检测带 ＦＡＭ荧光基团的细胞．占总细胞的７３．４３％ 图１转染２４ ｈ后转染效率检测 Ｏ １ ２．３转染后ｍｉＲ．３７５表达上调应用实时荧光定 咖 ㈣ 量ＰＣＲ检测转染后实验组、ＮＣ组及对照组ＨＥＣ— １．Ｂ细胞中ｍｉＲ．３７５的表达水平（图２）。实验组明 显高于ＮＣ组和对照组（Ｐ＜０．０５）。 １ 实验分组 图２转染４８ ｈ后ＨＥＣ一１．Ｂ细胞中ｍｉＲ一３７５的表达水平 ２．４ ｍｉＲ．３７５抑制细胞增殖 转染后４８ ｈ用 ＣＣＫ一８测实验组、ＮＣ组ＨＥＣ １一Ｂ细胞的增殖情况 （如图３），实验组明显受抑，两组间差异有统计学 意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。 ２．５ ｍｉＲ一３７５促进细胞凋亡转染后７２ ｈ流式细 胞仪检测细胞凋亡情况。转染组细胞凋亡增多，差 异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）．如图４。 ３讨论 ＭｉＲＮＡ是重要的转录后调控因子，不但参与 调控生长、细胞增殖、凋亡、分化、代谢等生物基本 实用医学杂志２０１３年第２９卷第２期 １７９ 子宫内膜癌中较正常子宫内膜呈低表达，与其在 胰腺癌、肝癌、胃癌及头颈部肿瘤等多种肿瘤组织 中低表达的结论一致。本研究进一步证实ｍｉＲ一３７５ 在Ⅱ型子宫内膜癌中也具有类似的抑癌基因作 用。选取ＨＥＣ．１．Ｂ细胞作为研究对象。合成具有上 调ｍｉＲ．３７５的核苷酸模拟物，通过Ｌｉｐｏ ２０００转染 细胞。用流式细胞仪检测转染带荧光基团模拟物 后的细胞．转染效率达７０％以上。认为转染效果佳。 １ 为了确定转染后ｍｉＲ．３７５表达增加，我们用实时 实验分组 图３转染后４８ ｈ细胞增殖情况 荧光定量ＰＣＲ加以验证，结果实验组较ＮＣ组 和对照组明显升高，证实转染成功。ＣＣＫ．８检测示 １弱０ ＇ｔ｛ Ｉ １霸０ｏ ｑ｛ Ｉ Ｉ ｌ：ｉ１０蚕’ 四．｛Ｉ ！转染ｍｉＲ一３７５模拟物后细胞增殖明显受抑，表明 ｍｉＲ一３７５有抑制该细胞增殖的作用。为了进一步研 究ｍｉＲ．３７５对细胞凋亡的作用。我们用Ａｎｎｅｘｉｎ Ｖ． ＦＩＴＣ／ＰＩ检测细胞凋亡情况。发现实验组细胞凋亡 明显增加，ｍｉＲ．３７５能促进细胞凋亡。 综上所述。ｍｉＲ．３７５在Ⅱ型子宫内膜癌中呈低 表达，可促进肿瘤细胞的凋亡．抑制肿瘤细胞增 殖．可能起到抑制肿瘤生长和发展的作用．有可能 成为Ⅱ型子宫内膜癌基因治疗的潜在靶点，但 过程，也广泛参与肿瘤相关基因的调控。ｍｉＲＮＡ作 ｍｉＲ．３７５可能作用的靶基因仍需进一步研究。 为癌基因或抑癌基因发挥作用，其异常表达参与了 ４参考文献 肿瘤的发生和发展，可能在肿瘤的诊断和治疗中扮 ［１］ Ｍａｍｉｔｚ Ｓ，Ｋｏｈｌｅｒ Ｃ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ 演重要的角色。 ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｓｔｒａｈｌｅｎｔｈｅｒ Ｏｎｋｏｌ，２０１２，１８８ ＭｉＲ．３７５参与多种肿瘤的形成和发展，在胰腺 （１）：１２—２Ｏ． ［２］ Ｋａｒａａｙｖａｚ Ｍ，Ｚｈａｎｇ Ｃ，Ｌｉａｎｇ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ 癌、肝癌、胃癌及头颈部肿瘤中呈低表达￣４，６－９］，调 ｏｆ ｍｉＲ一２０５ ｉｎ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１２，７ 控肿瘤细胞的增殖和凋亡。研究发现ｍｉＲ一３７５调 （４）：ｅ３５１５８． 节不同的ｍＲＮＡ表达起到不同的生物作用。在胃 ［３］ｄｅ Ｓｏｕｚａ Ｒｏｃｈａ Ｓｉｍｏｎｉｎｉ Ｐ，Ｂｒｅｉｌｉｎｇ Ａ，Ｇｕｐｔａ Ｎ，ｅｔ ａ１． 癌中ｍｉＲ ３７５以ＪＡＫ２为靶基因起抑癌基因的作 Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｄｅｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｍｉｃｒｏＲＮＡ一３７５ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ￣ｅｄｂａｃｋ ｌｏｏｐ ｗｉｔｈ ｅｓｔｒｏｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｌｐｈａ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ 用 。ｍｉＲ一３７５通过调控ＹＡＰ的表达抑制肝癌细胞 ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２０１０，７０（２２）：９１７５—９１８４． 的增殖和迁移Ｅ 。研究认为ＰＤＫ１也是ｍｉＲ．３７５的 ［４］Ｄｉｎｇ Ｌ，Ｘｕ Ｙ， ｚ ｈａｎｇ Ｗ， ｅｔ ａ１．ＭｉＲ一３７５ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ 靶基因之一，可影响食管癌细胞的生物学功 Ｅ ］。 ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｂｙ 子宫内膜癌是妇科常见的肿瘤之一，在一些 ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ＪＡＫ２［Ｊ］．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ，２０１０，２０（７）：７８４—７９３． 欧美国家，已成为妇科最常见的肿瘤。根据临床和 ［５］Ｃｈｏ Ｈ Ｍ，Ｊｅｏｎ Ｈ Ｓ，Ｌｅｅ Ｓ Ｙ，ｅｔ ａ１．ｍｉｃｒｏＲＮＡ一１０１ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｌｕｎｇ ｃａｎｃｅｒ ｉｎｖａｓｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ ｚｅｓｔｅ 病理特点，子宫内膜癌可分为Ｉ型和Ⅱ型。Ｉ型为 ｈｏｍｏｌｏｇ ２［Ｊ］．Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ Ｍｅｄ，２０１１，２（５）：９６３－９６７． 雌激素依赖型，Ⅱ型为非雌激素依赖型…］。临床 ［６］Ｌａｄｅｉｒｏ Ｙ，Ｃｏｕｃｈｙ Ｇ，Ｂａｌａｂａｕｄ Ｃ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｒｏＲＮＡ ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ 上，大多数子宫内膜癌为Ｉ型，占新发病例的７０％ ｉｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ ｔｕｍｏｒｓ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ Ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ～８０％，病理类型多为子宫内膜样腺癌，预后较 ｏｎｃｏｇｅｎｅ／ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ， 好Ｅ１２］。１１型子宫内膜癌约占２０％～３０％，但组织学 ２００８，４７（６）：１９５５－１９６３． 分化、肌层浸润、淋巴转移和复发率较Ｉ型子宫内 ［７］Ｌｉｕ Ａ Ｍ，Ｐｏｏｎ Ｒ Ｔ，Ｌｕ Ｊ Ｍ．ＭｉｃｒｏＲＮＡ一３７５ ｔａｒｇｅｔｓ Ｈｉｐｐｏ— ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｏｒ ＹＡＰ ｉｎ ｌｉｖｅｒ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｕｍｏｒ 膜癌有显著差异，预后较差［ｎ］。目前，关于ｍｉＲＮＡ ｐｒｏｐｅ￣ｉｅｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ，２０１０，３９４ 在子宫内膜癌。尤其是Ⅱ型子宫内膜癌中的作用 （３）：６２３－６２７． 机制研究甚少。Ⅱ型子宫内膜癌预后差，远期生存 ［８］Ｍａｔｈｅ Ｅ Ａ，Ｎｑｕｙｅｎ Ｇ Ｈ，Ｂｏｗｍａｎ Ｅ Ｄ，ｅｔ ａ１．ＭｉｃｍＲＮＡ 率较低，寻找基因治疗的潜在靶点，可能成为其治 ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｏｐｈａｇｕｓ：ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｓｕｒｖｉｖａｌ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ 疗及改善预后的新突破。 Ｒｅｓ，２００９，１５（１９）：６１９２－６２００． 我们通过之前的研究已发现，ｍｉＲ一３７５在Ⅱ型 ｆ ９］ Ｉｓｏｚａｋｉ Ｙ，Ｈｏｓｈｉｎｏ Ｉ，Ｎｏｈａｔａ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ １８０ 实用医学杂志２０１３年第２９卷第２期 ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔａｒｇｅｔｓ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｂｙ ｔｕｍｏｒ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ｍｉＲ一３７５ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｓｔｏｎｅ ａｃｅｔｙｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｔｕｍｏｕｒ ａｇｇｒｅｓｓｉｖｅｎｅｓｓ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ［Ｊ］．ＥＭＢＯ Ｍｏｌ Ｍｅｄ，２０１２， ４（８）：８０８—８２４． ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｉｎｔ Ｊ Ｏｎｃｏｌ，２０１２，４１（３）：９８５－９９４． ［１２］舒珊荣，李小毛．子宫内膜癌基因研究进展［Ｊ］．实用医学 杂志，２０１０，２６（１９）：３４６７—３４６８． ［１Ｏ］Ｌｉ Ｘ，Ｌｉｎ Ｒ，Ｌｉ Ｊ．Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ Ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＭｉｃｒｏＲＮＡ一３７５ Ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ＰＤＫ１ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｄｉｇ Ｄｉｓ Ｓｃｉ，２０１１，５６（１０）：２８４９－２８５６． ［１３］Ｈｉｌｌ Ｅ Ｋ，Ｄｉｚｏｎ Ｓ．Ｍｅｄｉｃａｌ ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｎｃｅｒ： ｃｕｒｒｅｎｔ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ ｎｏｖｅｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｄｒｕｇｓ，２０１２， ７２（５）：７０５－７１３． ［１１］Ｗｉｌｄ Ｐ Ｊ，Ｉｋｅｎｂｅｒｇ Ｋ，Ｆｕｃｈｓ Ｔ Ｊ，ｅｔ ａ１．ｐ５３ ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ ｔｙｐｅ ＩＩ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ｉｎ ｍｉｃｅ ａｎｄ ｇｏｖｅｒｎｓ ｅｎｄｏｍｅｔｒｉａ１ （收稿：２０１２—０８—０５编辑：黄月薪） ＨｂＨ病合并多器官损害１例 张佳佳黄道政王首红覃铁和 患者女．２５岁，因“面色苍白２５ 常，病理征未引出。 两大类型。缺失型Ｈｂ Ｈ病患者临床表 输血、脾切除及去铁治疗，且很少产生 输血依赖性。非缺失型Ｈｂ Ｈ病患者病 ＨｂＨ病大大增加，多数患者需要反复输 年，浮肿、气促１个月”于２０１２年４月 １１曰就诊我院。患者２５年前出生后即 被发现面色苍白，外院诊断“ 地中海 实验室检查：血常规，Ｈｈ ５８ ｇ／Ｌ、 现普遍较轻，多为轻度贫血，很少需要 ＲＢＣ ２．２１×１０ ＶＬ、ＷＢＣ １５×１０９／Ｌ、Ｐｉｔ ２７４×１０ ／Ｌ、ＨＣＴ ０．１９、ＭＣＶ ８７ ｆｌ、ＭＣＨ 贫血”，每年需输血１—２次（具体不 ２６ Ｐｇ、ＭＣＨＣ ２９９ ｇ／Ｌ。生化：ＳＣｒ １４６ 情往往较重，且铁负荷风险较缺失型 详），未曾行去铁治疗。２００４年因“脾功 能亢进”行“脾脏切除术”。近１个月症 ｔｘｒｎｏｌ／Ｌ，ＢＵＮ １３．７ ｍｍｏｌ／Ｌ，ＴＢＩＬ ６９．５ ｐ￣ｍｏｍｌ／Ｌ，ＤＢ ２８ ｔｚｍｏｌ／Ｌ，ＡＬＴ ４８ Ｕ／Ｌ， 血及排铁等治疗，且该人群往往由于长 因素导致铁负荷增高引起继发性血色 状加重，伴全身浮肿、气促，伴发热。 既往有“扩张型心肌病、心房纤 ＡＳＴ １１２ Ｕ／Ｌ：餐后２ ｈ血糖ｌ５．６３ 期反复输血及未进行标准去铁治疗等 ｍｍｏｌ／Ｌ，ＧＨｂＡ１ｃ ６％。ＮＴ－ＰｒｏＢＮＰ １ １ ２５１ 颤、１型糖尿病、肺动脉栓塞症、门静脉 ｎｇ／ｍＬ。凝血指标： ２０ Ｓ，Ｐ，ｒＡ ４５％。 病导致多系统器官功能受损甚至衰竭。 及属支广泛静脉血栓形成、肝前性门 Ｇ一６一ＰＤ检测正常。ＳＦ ７ ３６８ ｎｇ／ｍＬ，ＳＩ 本例患者为缺失型Ｈｂ Ｈ病 （一ＳＥＡ／一 ４．２），基因型轻，无长期频繁 脉高压综合征、继发性闭经、胆囊结 １９．２ Ｉｘｍｏｌ／Ｌ．ＴＦ ０．９６ ｇ／Ｌ．ＥＰＯ ７６９ ｍＩＵ／ 石”史，不规则治疗，无长期服用“糖皮 ｍＬ，ＶｉｔＢｌ２ ５６９ ｐｍｏｌ／Ｌ，叶酸３．４６ ｒｉｇ／ 输血史。但临床症状严重，病程出现多 质激素”等药物史。２０１０年因急性阑尾 ｍＬ。血红蛋白电泳：ＨｂＨ ７．７５％，Ｈｂ 系统器官损害并发症。目前国内外报道 炎行“阑尾切除术”，同年因“左桡骨骨 （Ａ＋Ｆ）９０．５１％．ＨｂＡ２ １．７３％，血红蛋白 该种缺失型Ｈｂ Ｈ病合并严重全身多器 折”行“左桡骨骨折内固定术”。 否认药敏史。父母均为农民，否认 “地中海贫血”家族史。 Ｈ包涵体５０％，变性珠蛋白小体７０％。 官损害案例较为罕见。该例缺失型ＨｂＨ ＋１３地中海贫血基因检测：一ＳＥＡ／． 病患者基因型及临床表现严重不符，我 仅４．２（ＨｂＨ病）；Ｂ地贫基因突变检测 们推测原因如下：同时合并非缺失型 未见异常。辅助检查：（１）心电图：心房 ＨｂＨ病导致铁负荷风险增高；存在铁代 体检：神清。体温３７．５℃，呼吸２２ 次／ｍｉｎ，脉搏９５次／ｍｉｎ，血压１３５／７０ 纤颤；（２）心脏彩超：全心扩大，左右室 谢障碍。上述原因将可能导致或加重机 ｍｍＨｇ。发育正常，鼻梁塌陷。贫血貌， 收缩功能明显减退。ＬＶＥＦ ２４％；中度 体铁过载，引起继发性血色病。 皮肤、巩膜轻度黄染。双肺底闻少量湿 二尖瓣反流．重度三尖瓣反流，轻度 诊疗体会：地中海贫血患者。应尽 性哕音，无哮鸣音。心率１００次／ｒａｉｎ， 肺高压；少量心包积液；（３）胸部＋全腹 早完善地贫基因检测以指导诊疗及协 律欠齐，第一心音强弱不等，心尖部闻 ＣＴ平扫及增强扫描：少量心包积液；下 助判断预后。中间型或严重地中海贫血 收缩期３／６级吹风样杂音。左上腹见 肺动脉分支多发栓塞：肝硬化，脾脏未 患者，应该接受规范化治疗（包括定期 陈旧手术瘢痕，全腹未触及包块，无腹 见显示；双肾弱强化区，考虑栓塞可能 输血、排铁等），并定期检测铁负荷指标 痛反跳痛，肝肋下未及，有移动性浊 性大；胆囊泥沙样结石；腹水。 及肝脏、胰腺、心脏等相关器官功能评 音。四肢轻度浮肿。四肢肌张力肌力正 诊断：（１）ＨｂＨ病（缺失型）；（２） 估．尽可能避免或延缓血色病发生。当 继发性血色病（累及心脏、肝脏、胰腺、 患者出现不能以一元论解释的心脏、肝 性腺、血液等多系统器官损害） ｄｏｉ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１００６—５７２５．２０１３．０２．００６ 脏及内分泌等多系统器官损害时，应注 入院后予积极抗感染、输血、利尿、 意排除是否合并系统性疾病如地中海 强心及去铁、抗凝等对症支持治疗，效 贫血，尤其是在地中海贫血高发地区。 果欠佳，全心功能衰竭难以纠正。患者 地中海贫血患者，如出现器官功能损 最终因循环衰竭抢救无效死亡。 讨论作者单位：５１００８０广州市．南方医科 大学珠江医院（张佳佳）；５１００８０广州市， 广东省人民医院重症医学科，广东省老年医 害，尤其是单系统器官功能损害．如扩 学研究所ＩＣＵ（黄道政，王首红，覃铁和） 通信作者：覃铁和Ｅ．ｍａｉｌ：ｄｒ．ｑｉｎ＠１２６． Ｈｂ Ｈ病是Ｏ／．地中海贫血 张型心肌病、糖尿病或肝硬化时．要注 （ ．ｔｈａｌａｓｓｅｍｉａ）的一种亚型，分为缺失 意排除继发性血色病可能。 型（无点突变）和非缺失型（有点突变） （收稿：２０１２—０９—２２编辑：吴淑金）