●文／湖南农业大学动物科学技术学院许宝红 大鲵属于两栖纲（Ａ ｍＰｈ ｉｂ ｉａ）、有尾目 （Ｖｒｏｄｔｌｅ）、隐鳃鲵科（Ｃｒｙｐｔｏｂｒａｎｃｈｉｄａｅ）、大鲵 属（Ａｎｄｒｉａｓ），是现存两栖动物中最大的一种［１］， 是我国特有的两栖动物。由于大鲵资源的稀缺、人工 繁殖技术壁垒以及其特殊的进化地位，大鲵成为动物 研究学者们热点研究对象。为了对大鲵的人工繁殖特 点进行相关研究，笔者从大鲵形态学、生长环境、繁 殖特性、繁殖分子生物学等方面作一综述。 一、大鲵形态学 大鲵财牛仔环境的要求较高，必 降剑１０ ：以卜时，人鲵 厶』Ｊ 大鲵分头、躯干、四肢和尾四部 须 一定的纬度和海拔，植被与水 减弱，慢慢进入冬眠状急 分。头大而宽扁，嘴大而宽阔，上下 源，气候 水温等条件下，才能适 年３川 旬就 始活动搬食 颚前缘有尖锐而坚硬、呈锯头状的小 应其生Ｋ。大鲵一般生活在海拔为 温仵２８ ：以ｌ 时有Ｈ，Ｉ还会钉 齿；粗壮的躯十，肥厚短而扁平的四 ２００～８００ｍ的清澈溪水洞中，水质ｐＨ 现象 。大鲵食物来源 肢，前肢４指，后肢５趾，前肢短于后 值的为６．３～７．５，陶峰勇等 啮过对不 虫、鱼类、蛙类、ｔｉｔ壳类干¨ 肢，指、趾末端呈钝圆型，没有爪， 同的地方测量，测量得ｍ大鲵生长的 最喜爱吃的是鱼、泥鳅和昆 后肢趾间有浅蹼。椭圆形而较短的尾 最佳ｐＨ为６．４；溶氧在５～６ｍｇ／Ｌ以 粉虫． 由Ｊ：成年大鲵比较笨 大概占全长的１／３，后端侧扁，上下方 Ｉ：。大鲵白天潜居在有回流水的洲八 ，敏捷，觅食时小追捕，．ｊ 呈鳍状 。大鲵体表光滑无鳞，皮肤 每… 尾占据一穴，柄息洞穴一般 的保护色来迷惑 物 人鲫 润滑具粘液，当皮肤受到刺激时能分 都不随意变动，在傍晚和夜间的时候 力非常强， Ｊｆ以儿Ｉ 人小ｊ』 泌大量白色状粘液 ０。真皮内有丰富 出来游动并捕食，觅食后仍返回原来 鲵对声音比较敏感，人鲵公 的色素细胞，因此大鲵体色能够随着 的洞穴 ｌ。温度对大鲵生长与发育具 的Ｊ符占产：生反Ｊ ， 些Ｊ！ｉ 环境的不同而呈现多种颜色，例如有 有决定性的影响，大鲵最佳生｝∈水温 大鲵产生激烈的防御反』、 ， 暗黑色、黄色、金黄色、红棕色、褐 为ｌ６～２２℃， 低于８℃或高于２５ ｏ【： 则对 色等颜色的大鲵。 时，大鲵觅食缓慢，生长变缓 ０ 大 鲵是变温动物，其体温与其所生活的 ‘吸 ＪＩ作 三、大鲵繁殖特性币 人鲵足 ，卜动物，体外 二、大鲵生长环境及摄食 环境相一敛。在每年１ １月下旬水温下 ６０・《当代水产》２０１１年８Ｆｌ 年产一次卵，与其它两栖动物一样， 性腺发育具周期性，一年一个性周 期，每年的５～１Ｏ月是其生殖季节， 其中主要在７～８月。阳爱生等 嗵过 研究大鲵性腺发育的组织学，发现夏 季是大鲵性腺成熟的主要季节，而夏 末秋初是在繁殖的盛期，但是卵巢在 ５～１０月都有成熟卵。葛荫榕等［７］认 为，初秋（８月上、中旬）是大鲵产卵 主要季节。而王文林，蒋发俊等 调 查了大鲵的自然繁殖习性，发现春、 夏、秋三季都是大鲵的繁殖季节，但 主要集中于初秋繁殖，这与阳爱生得 结论相符。高温和少活动可能是造成 夏季少见繁殖主要原因，也有可能因 为生活区域不同和区域食物结构及组 成的不同，生殖期也不一致。如四川 在５～６月，湖南在５～９月，湖北、陕 西、重庆在７ ８月。至于大鲵的性成 熟期，宋鸣涛等 认为自然界的体长 在２６ 以上的大鲵个体的性腺基本成 熟，野生大鲵在５岁龄时性腺就发育 成熟。李峰等＿１。 研究认为大鲵的性成 熟应综合考虑体长及体重两方面，体 长在３２ｃｍ以上，体重在３００ｇ／２）３２的大 鲵性腺就基本成熟，能够产生成熟的 卵子和精子。阳爱生等 认为雌性个 体性腺发育成熟主要在夏季，而雄性 个体则多在秋季，野生大鲵这种性腺 发育不同步是导致繁殖率低的主要原 因。在大鲵的人工繁殖方面，李骏珉 … 发现雄性大鲵性腺发育成熟略早于 雌性大鲵。在规模化繁殖上，大鲵的 雄性也具有性成熟率比较低，与雌性 性腺发育不同步的特性 。为了解决 ＤＮＡ为研究对象。对于大鲵的染色体 大鲵雌雄性腺发育不同步的问题，乔 数目，通过赵尔宓“卅研究，大鲵染色 志刚等 在大鲵的人工繁殖过程中， 体数目在５６～６４之间。２００２年，有研 通过采用体外保存精子的方法延长了 究通过对大鲵中期分裂相的完整照 产出精子的存活时间，从而降低了大 片分析得出大鲵体细胞染色体数目 鲵精子和卵子产出不同步的影响，以 ２ｎ＝６０ 。我们知道鱼类性和两栖动 提高卵子受精率。另外，根据王文林 物的染色体均处于进化的原始状态， 等［１４］观察所知大鲵孵化期约３５～４２ 而且大多种都是不具有异形性染色 天，孵化期间水温应在１５℃～２５ｃＣ 体，有些也仅仅是在性相关区域（Ｓｅｘ 范围。刘鉴毅等 也对大鲵的胚胎发 ｒｅｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ）有分化，有些甚至还不 育进行了研究观察，结果表明大鲵在 清楚其是否存在性染色体，同时温度 水温１９土０．２℃时历经３５～３９ｄ才能孵 及其它因素也会影响两栖类性别的分 出 化，因此两栖动物的遗传情况比较复 杂，也是一个值得探索的课题“ ”。 四、大鲵分子生物学研究 ２、ＤＮＡ，蛋白水平上研究 １、大鲵细胞水平上研究 ２．１大鲵遗传多样性 大鲵遗传物质的研究可分为两个 大鲵主要分布在长江、黄河及 层次：一是细胞水平，主要是以核型 珠江中上游支流的山涧溪流中，因 为研究对象；二是分子水平，主要以 此关于大鲵遗传背景的研究还不是 ６１・《当代水产》２０１１年８月 很透彻。Ｍｕｒｐｈｙｃ等 。 通过分析大鲵 ｍｔＤＮＡ Ｃｙｔｂ和ＡＴＰ一６基因的序列，显 鲵人工繁殖之所以还具有相当的难度，在于我们还不清 示大鲵的遗传多样性较低；同时陶 楚人工培育亲本成熟所需要的温度、水流、饵料、密度、性 比等生物环境因子，其次是人工催产所用药物及剂量、注射 峰勇等口 也分析了珠江、黄河和长江 三个地理单元的大鲵ｍｔＤＮＡ控制区序 时机的把握还有待探索。目前在全国掌握了大鲵人工繁殖技 列，也认为大鲵的遗传多样性比较 贫乏。方耀林等 研究了汉水流域的 大鲵，２８尾大鲵总共产生了８种单倍 型，在长为７５７ｂｐ的ｍｔＤＮＡ控制区里 检测出１７个突变位点（其中不包括插入 和缺失），单倍型间的核苷酸平均变异 率才０．７％，说明大鲵的遗传变异水平 还较低，究其原因，主要有以下几个 方面，第一，大鲵的个体大、生殖周 期较长这是主要原因；第二，由于大 鲵对已经适应的生态的依赖性强，导 致不同水域的大鲵种群问的基因交流 比较困难 ；第三，可能大鲵在它物 种进化的某个阶段曾经遭遇了“遗传 瓶颈”。 ２．２大鲵蛋白酶的研究 在酶学研究上，上世纪８Ｏ年代 末，马成仓，李清芳 用离子交换层 析法分离了大鲵乳酸脱氢酶同工酶。 ２００３年，沈国民等 初步分析大鲵 二十四种组织器官的碱性磷酸酶，发 现２３０ＫＤ和２００ＫＤ的碱性磷酸酶占有 优势，肝脏中主要含有２３０ ＫＤ的碱性 磷酸酶；除此之外，在肾脏和心脏中 还存在一种２５０ＫＤ的碱性磷酸酶，碱 性磷酸酶的活性强弱以心脏中最强； 消化系统各器官间碱性磷酸酶的活性 相似；活性以眼球最弱。彭亮跃，肖 亚梅骆剑等 剐也对中国大鲵不同组织 同工酶作了比较研究，发现中国大 鲵，心脏、卵巢、肾脏表达出ＬＤＨ１ 术的科技人员屈指可数，这些都对大鲵应用科学技术的手段 进行保护带来了困境。 和ＬＤＨ５两条酶带，而胰脏、肝脏、 关；但是大鲵的大脑只在酸ｌ生条件下 肌肉则只表达出ＬＤＨ５一条酶带。同 检出蛋白水解酶，可能与其神经系统 一组织中ＬＤＨ１的含量远低于ＬＤＨ５； 得的不发达有关；而肾脏在３种条件 分析了不同组织酶的表达水平，发 下均检出蛋白水解酶，并具有检ｆＩＪ种 现肌肉的ＬＤＨ５酶表达最强，肝脏次 类多，活性强的特点，表明肾脏的代 之，心脏中ＬＤＨＩ和ＬＤＨ５两条带表达 谢活动较强。乔志刚等 。 研究ｒ大 都较强，表达最弱的是胰脏。 鲵消化系统１３种器官的蛋白水解酶种 蛋白水解对于生物的生命活动来 类和活性，结果显示大鲵肝脏和胰脏 说是必不可少的，蛋白水解酶广泛参 的蛋白水解酶活性相似，表明在食物 与了蛋白质的酶解修饰、细胞的迁 消化方面，大鲵的肝脏和胰脏具有同 移、组织再生与修复、顶体反应和胚 等重要的作用。而大鲵十二指肠的蛋 胎植入等许多生理反应，蛋白水解酶 白水解酶活性不仅适应较宽的ｐＨ范 功能失调也会造成许多病理的发生。 围，而且在卜 种消化器官中其蛋白 因此，研究大鲵组织器官的蛋白水解 水解酶活性表现最强。推测十三种消 酶种类和性质对于我们了解大鲵的生 化器官中十二指肠的消化作用更强。 理、生化特征是十分必要的。辛泽华 ２．３大鲵基因学研究 等 １通过蛋白水解酶复性电泳的方法 到目前为止，大鲵遗传学的资料 分析了大鲵脑、肺、肾脏、心脏、眼 仍然比较缺乏，但这并不影响人们对 球、肌肉和皮肤的蛋白水解酶种类和 其研究热情。随着分子生物学技术的 活性，大鲵７种组织器官的蛋白水解 发展，有学者已经分离出了大鲵线粒 酶活性表现出中性＞酸性＞碱性的趋 体基凶组全长并完成了测序Ｔ作 。 势，适宜ｐＨ范围为酸性～中性，【大ｌ 杨芳，贺智敏，詹显全等 构建和鉴 此大鲵对生活水体的ｐＨ值升高十分 定了质量很高的大鲵肝脏组织定向 敏感，当其生活水体的ｐＨ值升高到 ｃＤＮＡ文库。但在其它动物里，也有 ９．０以上时，大鲵机体就会受到严重伤 不少学者利用ＰＣＲ或者核酸杂交技术 害，这可能与其实验发现的在ｐＨ９．５ 在ｃＤＮＡ文库中筛选获得相关的基 时大鲵蛋白水解酶活性受到抑制有 ［３３１ｏ但还未见大鲵特异的相关基【大ｌ的 ６２・《当代水产》２０１１年８月
