巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告

一． 实验目的

1. 通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬

细胞在非特异性免疫中的功能。

2. 掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。 3. 学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。

二． 实验原理

1. 向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。

2. 台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。是一种溶酶体染色的方法。 3. 当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程

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三． 实验材料及设备

1. 实验材料：

a) 连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只 b) 鸡红细胞悬液 c) 生理盐水 2. 实验设备： a) 普通光学显微镜 b) 载玻片、盖玻片若干 c) 注射器

d) 染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等

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四． 实验方法及步骤 1. 小鼠处理与巨噬细胞采集

a) 连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。

b) 选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。

c) 一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。按摩小鼠腹部。

d) 20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。

e) 3分钟后，引颈法处死小鼠

f) 迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。

g) 在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。

2. 观察

在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。注意避免玻片液体干涸。

五． 实验结果

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小鼠红细胞

巨噬细胞

鸡红细胞

已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞

图 1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜 不染色）左上角示未知种类细胞

100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。巨噬细胞体积最大，未吞噬鸡红细胞时呈边缘不规则的球状，可见胞质中存在不均匀分布内含物。部分巨噬细胞中可见一个或多个颜色更深的橄榄形鸡红细胞。小鼠红细胞呈现两面凹的圆饼状，并且存在一种外表呈不规则突出的细胞，大小和红细胞相似。巨噬细胞较为固定，可见小鼠红细胞在生理盐水中悬浮飘动。长时间录像观察可见巨噬细胞伸出伪足缓慢移动。

六． 实验讨论 1. 实验结论：

当小鼠腹腔中的巨噬细胞遇到鸡红细胞以后，鸡红细胞属于外源性抗原。非特异性识别作用使巨噬细胞迅速聚集并开始

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吞噬鸡红细胞。在显微镜光镜下可见正在或已被巨噬细胞吞噬的鸡红细胞。

2. 讨论一：在光镜下可观察到腹腔提取液中存在外表呈不规则突出的细胞，它是什么细胞，为什么？ a) 猜想一：该细胞为小鼠血小板

查询资料可知：血小板是从骨髓成熟的巨核细胞胞浆解脱落下来的小块胞质。所以血小板并没有细胞结构，且体积远小于红细胞。和观察结果不符，故不是小鼠血小板。

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图 2红细胞血小板巨噬细胞电镜观察

b) 猜想二：该细胞为部分失水的小鼠红细胞 光镜下观察发现这样一组细胞（图三）：

中下是正常的小鼠红细胞，右上可以看出是略微有些皱缩的小鼠红细胞，而左上为未知细胞。可

图 3未知细胞、萎缩红细胞、正常红细胞对比

见三者体积相似，颜色相似，左上未知细胞的伪足数量也和右侧失水皱缩红细胞凸角数相似。同时由图四可见该未知细胞有一个面较

图 4可见扁形形状的未知细胞

平整。和小鼠红细胞扁平形状相对应。 故此可推测出该细胞为部分失水的小鼠红细缘的盐浓度升高，造成红细胞失水。

胞。产生的原因可能是载玻片上的生理盐水不断蒸发，导致边

3. 讨论二：在巨噬细胞周围，有时细胞“吐出”的透明空泡，这是什么原理？

巨噬细胞除了非特异性识别外来抗原和衰老死亡体细胞外，还兼有分泌能力。在某些情况下，巨噬细胞可以通过形成空泡来将水解酶分泌

到细胞外，抵抗病原体的侵袭，由于水解酶溶解时无色，故观察时容易表现为一个透明的空泡。

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且通过文献查询可知，部分巨噬细胞在凋亡期也会产生空泡。

七． 参考文献

[1]李津婴,许燕群.红细胞形态学对溶血性疾病的诊断意义[J].诊断学理论与实践,2010,(3):214-217.

[2] 翟中和，王喜忠，丁明孝等.《细胞生物学》[M].高等理科教育，2004(1):123-128.

[3]解丽芳,王甜,杨军.对“小鼠腹腔巨噬细胞吞噬作用的观察实验”的拓展探索[J].生物学杂志,2012,(5):112-113. DOI:10.3969/j.issn.2095-1736.2012.05.112.

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