第３０卷第２期 中南林业科技大学学报 Ｖｏ１．３０ ＮＯ．２ ２０１０年２月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ＆．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｆｅｂ．２０１０ 南方主要枣品种授粉花粉离体培养的影响因子研究 唐宁浩 ，何钢 ，赵思东 ，李樊 ，刘贤桂 （中南林业科技大学ａ．林学院；ｂ．生命科学与技术学院，湖南长沙４１０００４） 摘要： 以南方适宜栽培的６个枣品种花粉为材料，研究了枣花粉离体培养的影响因子对花粉萌发的影响。结果表 明：枣花粉培养的适宜培养基中蔗糖含量为５ ～ｌ５ ，硼酸１００￣４００ ｍｇ／Ｌ，适宜温度为２５ Ｃ～３Ｏ Ｃ。硼酸对花粉管 的生长影响尤其明显。 关键词： 枣；花粉；萌发率；培养基 中图分类号：￥６６５．１ 文献标志码： Ａ 文章编号：１６７３ ９２３Ｘ（２０１０）０２—００４１—０３ Ａｆｆｅｃｔ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｉｎ ｖｉｒｔｒｏ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｕｊｕｂｅ’Ｓ ｐｏｌｌｉｎａｔｉｏｎ ｐｏｌｌｅｎ ＴＡＮＧ Ｎｉｎｇ—ｈａｏ ， ，ＨＥ—ｇａｎｇ ，ＺＨＡＯ Ｓｉ—ｄｏｎｇ ，ＬＩ Ｆａｎ ．ＬＩＵ Ｘｉａｎ—ｇｕｉ （ａ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ；ｂ．Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｌｉｆｅ—ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ； Ｃｅｎｔｒａｌ Ｓｏｕｔｈ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ ４ １ ０００４，Ｈｕｎａｎ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｏｌｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ６ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｕｊｕｂｅ ｇｒｅｗ ｉｎ ｓｏｕｔｈ，ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｃｏｍｂｉｎｉｎｇ ｗｉｔｈ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｃｕｌｔｕｒｅ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＳＵｃｒｏｓｅ ｗａｓ ５ ～１５％，ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ １ＯＯ～４００ ｍｇ／Ｉ ，ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ２５～３０ Ｃ．Ｂｏｒｏｎ ｗａｓ ｖｅｒｙ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｆｏｒ ｔｕｂｅ ｇｒｏｗｔｈ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｕｊｕｂｅ；ｐｏｌｌｅｎ；ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ；ｍｅｄｉｕｍ 枣是鼠李科Ｒｈａｍｎａｃｅａｅ枣属Ｚｉｚｙｐｈｕｓ Ｍｉｌ１．植 研尤其必要，笔者针对影响南方适栽的几个主要品种 物，是我国北方传统的栽培果树，和大多植物一样具自 花粉活力的敏感因子进行了初步研究，以期能对南方 交不亲和性，受粉花粉的发芽力对受精过程有直接影 枣的授粉花粉选择提供理论依据。 响，其发芽力的状况也影响着坐果率的多少口 。花粉 的储藏适宜低温、干燥、黑暗的环境，但是其活力也随 １材料与方法 储藏时间变长而降低，所以在授粉之前，对于储藏的花 粉有必要进行花粉发芽试验ｌ１ ］。近年我国南方枣树 １．１ 材料 发展迅速，基于南方花期多雨，往往造成枣受粉受精不 材料取自中南林业科技大学株洲校区试验园的 良，落花现象严重的现状，推广人工授粉在生产上就显 鸡蛋枣、大梨枣、大白铃、磨盘枣、金丝小枣、龙须枣６ 得特别重要，花粉发芽试验对指导往后的生产以及科 个品种的花粉。 收稿日期： ２００９——０９——０４ 基金项目： 湖南省自然科学基金项目（０６ＪＪ２００２２）；林业科技支撑计划项目子专题（２００６ＢＡＤ０１Ａ１７，２００６ＢＡＤ１８Ｂ０２） 作者简介： 唐宁浩（１９８５一），男，湖南株洲人，硕士研究生，主要从事森林培育研究 通讯作者： 何钢（１９６５一），男，湖南湘潭人，教授，硕上，从事生物技术教学和科研工作；Ｅ－ｍａｉｌ：ｈｅｇｏｎｇ２６２＠ｙａｈ。ｏ．ｃｏｍ．ｃｎ ４２ 中南林业科技大学学报 第３Ｏ卷 １．２ 方 法 管是否能达到胚囊的必要因素。在品种间看来，鸡蛋 枣、磨盘枣和龙须枣对硼酸的敏感性相对其它３个品 １．２．１蔗糖对发芽率的影响 在４ Ｃ下保存的花粉播在０．６％琼脂＋３００ ｍｇ／Ｉ 硼酸培养基上，培养基中分别加入５ 、１０ 、１５ 、 ２Ｏ 、２５ 蔗糖，每个浓度一个处理，对照不加蔗糖， 每个处理３个重复，花粉播好在２８ Ｃ下培养４ ｈ后，在 显微镜下镜检萌发花粉数，每个处理６个视野，观察 计算花粉萌发率 ］。 萌发率一萌发的花粉数／观察花粉总数×１００％。 １．２．２硼酸对发芽率的影响 基本培养基为０．６ 琼脂＋１０ 蔗糖，分别加 １００、２００、３００、４００、５００ ｍｇ／Ｉ 硼酸，不加硼酸为对照， 萌发率观测方法同上。 １．２．３温度对发芽率的影响 以０．６ 琼脂＋１０ 蔗糖＋３００ ｍｇ／Ｉ 硼酸基本 培养基，花粉条播好，在５ Ｃ、１５ Ｃ、２０ Ｃ、２５ Ｃ、３０ Ｃ、 ３５Ｃ温度下培养，花粉萌发率观测方法同上。 １．２．４吲哚乙酸对发芽率的影响 在０．６ 琼脂＋１０ 蔗糖＋３００ ｍｇ／．［ 硼酸的培 养基上，分别加１０、２０、３０、４０、５０ ｍｇ／Ｌ的ＩＡＡ，以不 加ＩＡＡ为对照，观察计算花粉萌发率，观测方法同上。 １．２．５琼脂对萌发率的影响 在１０ 蔗糖－４－３００ ｍｇ／Ｌ硼酸的培养基上分别加 ０．５ 、１．０％、１．５％、２．０ 琼脂，不加琼脂为对照组 （培养皿内放滤纸，滤纸上放载玻片，保湿的情况下培 养），观察花粉萌发率，方法同上。 ２结果与分析 ２．１ 蔗糖对发芽率的影响 从表１可知，在蔗糖浓度为０％～１５ 的范围内， 花粉发芽率随蔗糖浓度的增加而提高，但超过１５％ 时，其活力出现下降，当蔗糖浓度为２５ 时，发芽率下 降十分明显。蔗糖浓度在５ ～１５ 时，花粉的发芽率 差异不是很大，是花粉萌发最为适宜的蔗糖浓度。而 不同品种之间，鸡蛋枣花粉对蔗糖的敏感性较强，金 丝小枣对蔗糖的敏感性相较其他品种弱。 ２．２硼酸对发芽率的影响 从表２可知，在１００￣４００ ｍｇ／Ｌ的硼酸浓度范围 内，含有硼酸的培养基的花粉萌发率都显著高于对照 组，但当浓度超过５００ ｍｇ／Ｌ时，花粉萌发受到抑制。 对照组在同样情况下花粉管短，由此可见硼酸是花粉 种强，其中以龙须枣对硼酸的反应最为明显。 表１ 蔗糖浓度对枣花粉萌发的影响 Ｔａｂｌｅ １ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ ｏｎ ｐｏｌｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 表２硼酸对枣花粉萌发的影响 Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｂｏｒｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｐｏｌｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 十 ２８ Ｃ Ｆ堵养２４ ｈ。 ２．３温度对发芽率的影响 由表３可知，花粉在５ Ｃ条件下，花粉的萌发受到 抑制，且花粉管粗短有弯曲。在１５Ｃ～３０ Ｃ，花粉萌发 率随温度增加而提高，随后出现下降。在低温段５ Ｃ～ ２ＯＣ，金丝小枣的发芽率最低；在２Ｏ Ｃ～３５℃温度段， 磨盘枣和龙须枣的花粉的适应性比其它几个品种的 适应性要强。 表３温度对枣花粉萌发的影响 Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｏｎ ｐｏｌｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 温度／Ｃ 鸡蛋枣 大梨枣 大白铃 磨盘枣 金丝小枣 龙须枣 十 ５Ｃ Ｆ培养２４ ｈ，其余处理４ ｈ。 ２．４吲哚乙酸对发芽率的影响 由表４可知，吲哚乙酸对各品种花粉萌发的影响 不是很大，各品种间花粉萌发率相差不大，但都在吲哚 乙酸浓度为１０ ｍｇ／Ｌ的时候花粉萌发率达到顶峰。可 以看出，花粉萌发的因素中，吲哚乙酸的作用不明显。 第２期 唐宁浩，等：南方主要枣品种授粉花粉离体培养的影响因子研究 ４３ 表４ 吲哚乙酸对枣花粉萌发的影响 Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏａｕｘｉｎｇ ｏｎ ｐｏｌｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ 十 ２８Ｃ下培养２４ ｈ。 ２．５琼脂对发芽率的影响 从表５可知，从几个主要品种来看琼脂对花粉萌 发的影响不是很大，仅对磨盘枣和龙须枣的花粉萌发 率有一定的影响，但整体和吲哚乙酸相比，还有一定 的抑制，在观察组的视野中，花粉管短粗弯曲。 表５琼脂对发芽率的影响 Ｔａｂｌｅ ５ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｇａｒ ｏｎ ｐｏｌｌｅｎ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｒａｔｅ 十 ２８ Ｃ下培养２４ ｈ。 ３结论与讨论 （１）试验表明，硼酸对枣花粉的萌发有显著的促 进作用，尤其对花粉管的生长的促进作用更为明显。 琼脂和吲哚乙酸对花粉萌发的影响不很明显，且琼脂 对花粉管的伸长具有一定的抑制作用。枣花粉培养的 适宜培养基中蔗糖含量为５％～１５％，硼酸１ＯＯ～４００ ｍｇ／Ｌ，培养温度为２５ Ｃ～３Ｏ Ｃ。龙须枣在各最适因子 水平上的花粉萌发率较其它品种高，磨盘枣次之；而 大梨枣的花粉对蔗糖的敏感性要高于其他５个品种； 鸡蛋枣花粉的萌发率在各品种中表现中等。 （２）在所选材料中，鸡蛋枣的花粉对蔗糖的敏感 性较强；鸡蛋枣、磨盘枣和龙须枣的花粉对硼酸的敏 感性较强；磨盘枣与龙须枣的花粉在吲哚乙酸与琼脂 的试验中表现均比其他组有明显优势。鸡蛋枣在各组 试验中的表现较为稳定。可以由此看出，以上３个品 种的花粉在各个水平因子上的生活力较其他３个品 种花粉高，因此，在６个品种中，磨盘枣与龙须枣的花 粉可以优先考虑作为授粉花粉，鸡蛋枣花粉次之。 （３）试验材料萌发率在试验中表现都不是很突 出，这跟在低温下保存的时间长有关系，花粉的活力 随保存时问的增长而变小。 参考文献 ［１］胡芳名，谢碧霞．湖南枣子［Ｊ］．经济林研究，１９８３，１（１）：５—１２． Ｅ２３周 莹，何业华．湖南枣果在生长发育期营养成分含量变化研究 ＥＪ］．经济林研究，ｌ９９７，１ ５（１）：３２—３３． Ｅ３］王友保，张莉．花粉萌发与花粉管生长实验的改进［Ｊ］．生物学 通报，２００６，４１（１２）：５７． ［４］翁树章，李青英，陈育英，等．广东荔枝主要品种花粉生活力研究 初报ＥＪ３．果树科学，１ ９９０，７（２）：９１—９６． ［５］沈德绪．果树育种实验技术［Ｍ］．北京：农业出版社，１ ９９２． Ｅ６］王玖瑞，刘孟军，代 丽．枣组培中的品种差异及辣椒枣的组培 快繁＿Ｊ］．河北农业大学学报，２００３，２６（４）：５９—６１． Ｅ７］黄涛，董高峰，张兰英，等．生长素与乙烯在沙田柚上胚轴不定 芽再生中的作用ＩＪ］．广西植物，２００３，２３（２）：１６９—１７４． ［８］朱文勇，杜学梅，郭黄萍，等．梨枣组织培养快繁技术研究［Ｊ］．中 国农学通报，２００１，１７（４）：３４—３６． ［９］李师翁，范小峰，佟子林．三种枣栽培品种的离体培养再生植株 及快繁技术研究口］．兰州大学学报：自然科学版，２００１，３７（１）： １２６ １２８． ［１０］王玖瑞，刘孟军，代丽．枣树组织培养研究进展［Ｊ１．果树学 报，２００２，１９（５）：３３６—３３９． ［１１］金竹萍．枣离体胚培养及离体受精技术的研究［Ｄ］．太原：山西 大学，２００３． ［１２］何志祥．梨组织培养的研究［ＤＩ．长沙；中南林业科技大学， ２００５． ［１３］Ｓｋｏｏｇ Ｆ，Ｍｉｌｌｅｒ ＣＯ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｏｒｇａｎ ｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅｓ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｓｙｍｐｏｓｉａ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｌ９５７，５４（１１）：１１８一ｌ３Ｏ． ［１４］刘翠云，李艳，马洪明，等．黑山晋枣芽培养及植株再生研究 ＥＪ３．西北植物学报，１ ９９７，ｌ７（３）：３６２—３６７． ［１５］罗晓芳，田砚亭，李 云，等．金丝小枣组织培养快速繁殖的研 究ＥＪ］．北京林业大学学报，１９９６，１８（２）：９ １５． ［１６］李 云，王 宇，田砚亭．赞皇大枣组织培养快速繁殖技术研究 ＥＪ］．核农学报，２００２，１６（６）：３６０ ３６５． ［１７］王玉国，白 桦，陈云昭，等．枣树的组织培养与快速繁殖＿Ｊ］． 山西农业大学学报，１ ９９４，１４（４）：３７１—３７２． ［１ ８ Ｊ Ｙａｎｇ Ｓ Ｆ，Ｈｏｆｆｍａｎ Ｎ Ｅ．Ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｉｇｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，１９８４，３５：ｌ ５５—１８９． ［本文编校：吴彬］