第３０卷第６期 成 宁 学 院学报 Ｖｏ１．３０，Ｎｏ．６ ２ ０ １ ０年６月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｊ ｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｕｎ．２０１０ 文章编号：１００６—５３４２（２０１０）０６—００８９－０２ 野生果蝇唾液腺染色体标本制作技术细节分析 刘卫东 ，罗志清２ （１．成宁学院 化学及生命科学学院，湖北 成宁４３７１００； ２．通城县第二高级中学，湖北通城４３７４００） 摘要：采用减低染色时间、三种对比实验的方法发现一种良好的用醋酸洋红制作野生果蝇唾液腺染色体标本的 方法．作者同时对于野生呆蝇唾液腺染色体标本制作成败的技术细节作了分析． 关键词：果蝇；唾液腺；染色体；制作；细节 中图分类号：Ｑ一３４ 文献标识码：Ａ 果蝇唾液腺染色体制作是遗传学实验的一个基本实 酸进入细胞核（此时，在小光圈下可以看到细胞核中不透明 验，而在用野生果蝇唾液腺染色体制作制作过程中往往出 物体）．按ｌ：１加入醋酸洋红，染色不超过１ｍｉｎ．用力（３— 现唾液腺不易分离、唾液腺细胞核不易压破、制作的染色体 ４．５ｋｇ）压制． 标本伸展性不好，用醋酸洋红染色往往还出现染色过深、细 所有试验进行在室温１２～１５℃下进行． 胞质着色过深的现象．” ２研究结果 作者采用减低染色时间（教材上染色时间为 用方法一制作的染色体标本普遍存在着细胞核不易压 １０ｒａｉｎ¨ ）、三种对比实验的方法发现一种良好的用醋酸洋 破、染色体伸展不好、染色体与核质染色对比度不足等问 红制作野生果蝇唾液腺染色体标本的方法，具体为： 题，但细胞核与细胞质出现不同程度的染色（图一Ａ）． 获取唾液腺在水中放置一段时间，待唾液腺细胞吸水 用方法二制作的染色体标本细胞核破裂率提高、染色 至细胞核清晰可见，此时移至４５％的醋酸中，浸至醋酸进 体伸展状态改善，核质与染色体着色对比度增强．用在水中 入细胞核，然后再滴入醋酸洋红染液，染色时间不超过 吸涨后，细胞质与细胞核、染色体对比强的果蝇唾液腺（图 Ｉｍｉｎ，用力（３—４．５ｋｇ）压制，即可获得伸展状况良好的唾液 二Ａ）制作的标本，细胞质与细胞核、染色体对比增强，染色 腺染色体标本，同时细胞核也较容易压破． 体伸展状况良好（图一Ｂ、Ｃ）．而用在水中吸涨后，细胞质 １材料与方法 与细胞核、染色体对比度小，染色体伸展不好果蝇唾液腺细 １．１野生果蝇的来源 胞，（图二Ｂ）或用在水中吸涨后细胞核呈“白色”空洞状的 用苹果皮诱捕野生果蝇，用改良的蔗糖一玉米粉培养 唾液腺细胞（图二ｃ），这种方法不能获得制作良好的标本． 基在１２～１５￣Ｃ培养老熟的果蝇幼虫 Ｊ． 用方法三制作的染色体标本细胞核破裂率可达９５％ １．２试验方法 以上、染色体充分伸展、在小光圈条件下观察，染色体清晰 １．２．１药品 可见（图一Ｄ、Ｅ）．即使用在水中吸涨后，细胞质与细胞核、 （１）醋酸洋红的配制 染色体对比度小，染色体伸展不好果蝇唾液腺细胞，或用在 按遗传学实验介绍的方法配制 Ｊ，但在配制的过程，醋 水中吸涨后细胞核呈“白色”空洞状的唾液腺细胞，这种方 酸洋红煮沸后加入少许铁锈（可从生锈铁器上刮取）． 法也能获得制作良好的标本． （２）生理盐水 ３讨论 １．２．２研究方法 在用醋酸洋红制作染色体标本时，往往存在核质、染色 采用以下三种实验方案： 体同时着色的现象，造成标本制作的失败．用水吸涨的唾液 方法一：分离的唾液染色体放置水中，然后吸去多余 腺细胞可以看见细胞核、染色体逐渐清晰的过程，说明水在 水，仅保持湿润，直接加入醋酸洋红．染色不超过Ｉｍｉｎ．用 逐渐渗入细胞核的过程中，逐渐降低了核质内可被醋酸洋 力（３—４．５ｋｇ）压制． 红染色的物质的浓度．此时再用较大的力量（３—４．５ｋｇ）压 方法二：分离的唾液染色体放置在水中，待唾液腺细胞 制，膨胀的细胞核容易被压破，染色体随压破的细胞核中核 中细胞核在低倍物镜小光圈下清晰可见，按１：１加入醋酸 质流出的过程中，冲力可以使染色体的伸展状况一定程度 洋红，染色不超过１ｍｉｎ．用力（３～４．５ｋｇ）压制． 上得以改善，这样细胞质、核质与染色体出现不同程度的着 方法三：分离的唾液染色体放置在水中，待唾液腺细胞 色，这也许是用方法二制作的唾液腺染色体细胞核破裂率 中在小光圈下细胞核清晰可见；然后移至４５％醋酸浸至醋 提高、染色体伸展状态改善，核质与染色体着色对比度增强 ・收稿日期：２００９・１２－２０ 成宁学院学报 第３Ｏ卷 的原因所在．但用水中吸涨后，细胞质与细胞核、染色体对 中能被醋酸洋红染色物质的浓度，因此制作出类似“负染” 比度小，染色体伸展不好果蝇唾液腺细胞，或用水中吸涨后 的唾液腺细胞核．４５％醋酸是一种高效渗透剂，¨ 能有效地 细胞核呈“白色”空洞状的唾液腺细胞，这种方法不能获得 进入细胞核，而排除已进入细胞核中的水，在这个排除多余 制作良好的标本．原因可能为前者果蝇唾液腺细胞中能被 水的过程中使得染色体逐渐伸展，此时压制，膨胀的细胞核 被醋酸洋红染色的物质浓度高所致．而用在水中吸涨后细 核膜容易压破，染色体伸展良好．这也许是用方法三能制作 胞核呈“白色”空洞状的唾液腺细胞，水不能有效降低核质 较好唾液腺染色体标本的根本原因． Ａ ８ ｅ Ｄ Ｅ 图一：Ａ．方法一制作的唾液腺染色体标本（１００ Ｘ）Ｂ．方法二制作的唾液腺染色体标本（１００×）ｃ．方法二制作的唾液腺染色体标本 （４ＯＯ Ｘ）Ｄ．方法三制作的唾液腺染色体标本（１００ Ｘ）Ｅ．方法三制作的唾液腺染色体标本（４００×） Ａ 日 Ｃ 图二：Ａ．在水中吸涨后，细胞质－９细胞核、染色体对比强果蝇唾液腺；Ｂ．在水中吸涨后，细胞质与细胞核、染色体对比度小，染色体伸展 不好果蝇唾液腺；Ｃ．在水中吸涨后细胞核呈“白色”空洞状的唾液腺． 参考文献： ［３］刘祖洞，江绍慧．遗传学实验［Ｍ］．北京：高等教育出版 ［１］王建波，方成祥，鄢慧明，章洪志．遗传学实验教程 社，１９９０． ［Ｍ］．武汉：武汉大学出版社，２００４． ［４］余丙生，张仪．生物显微技术［Ｍ］．北京：北京农业大 ［２］刘卫东，吕小东．果蝇培养过程中各环节的优化［Ｊ］．生 学，１９８９． 物学教育，２００９，（９），５４．