不同加工工艺对冬凌草茶中冬凌草甲素含量的影响

󰀂化学测定方法

不同加工工艺对冬凌草茶中冬凌草甲素含量的影响

王晓燕,常断玲,李振国

1

2

1*

(1󰀁河南省食品药品检验所,郑州󰀁450003;2󰀁河南中医学院,郑州󰀁450008)

[摘要]󰀁目的:比较不同加工工艺对冬凌草茶中冬凌草甲素含量的影响。方法:采用HPLC法测定冬凌草茶中冬凌草甲

素的含量。结果:HPLC法测定冬凌草甲素的线性范围为168󰀁g~3360󰀁g,平均回收率为95󰀁96%,RSD为1󰀁38%(n=6)。结论:不同加工工艺对冬凌草茶中的冬凌草甲素含量影响较大。[关键词]󰀁冬凌草茶;冬凌草甲素;高效液相色谱法

[中图分类号]󰀁O657.7+2󰀁󰀁󰀁󰀁[文献标识码]󰀁A󰀁󰀁󰀁󰀁[文章编号]󰀁1004-8685(2010)08-1902-02

Comparasionofcontentoforidonininrabdosiarubescensteamadeindifferentmethods

WANGXiao󰀂yan1,CHANGDuan󰀂ling2,LIZhen󰀂guo1*(1󰀁HenanInstituteforFoodandDrugContro,lZhengzhou450003,China;2󰀁HenanCollegeofTraditionalChineseMedicine,Zhengzhou450008,China)

[Abstract]󰀁Objective:Tocomparethecontentsoforidonininrabdosiarubescensteamadeindifferentmethods󰀁Methods:ThecontentoforidoninwasdeterminedbyHPLC󰀁Results:Thelinearrelationshipoforidoninwas168󰀁g~3360󰀁gwiththerecoveryof95󰀁96%,andRSDwas1󰀁38%(n=6)󰀁Conclusion:Thecontentsoforidonininrabdosiarubescensteamadeindifferentmeth󰀂odsweredifferent󰀁

[Keywords]󰀁Rabdosiarubescenstea;Oridonin;HPLC󰀁󰀁冬凌草[Rabdosiarubesens(Henmsl󰀁)Hara]为唇形科香茶菜属多年生草本或亚灌木植物,该属植物全世界约有150种,但目前作为冬凌草入药的只有碎米桠一种[1]。该种主产于河南济源太行、王屋山区,在当地民间以泡茶、煮水的形式用于

[2]

治疗咽喉肿痛、食道癌等已有悠久的历史。目前已有制药企业以冬凌草为原料研发生产了多种中成药制剂及保健茶饮。市售冬凌草茶主要有清炒法和烘干法。由于冬凌草茶中主要有效成分冬凌草甲素对热不稳定[1],制作工艺极其重要。本实验以冬凌草中主要有效成分冬凌草甲素为考察指标,采用反相高效液相色谱法测定其含量,比较不同工艺所制冬凌草茶中冬凌草甲素的含量是否有差别,为控制冬凌草茶的质量提供了依据。

1󰀁材料与方法1󰀁1󰀁仪器与材料

Waters2690高效液相色谱仪(Millennium32工作站,2695PDA紫外检测器);METTLERAE240电子天平(瑞士);KQ-250型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

冬凌草甲素对照品购自中国药品生物制品检定所(批号为111721-200501),甲醇(色谱纯,MERCK),水为乐百氏纯净水。

冬凌草茶为市售品,一种为清炒茶,一种为烘干茶,各两批。

1󰀁2󰀁方法

1󰀁2󰀁1󰀁色谱条件󰀁色谱柱为资生堂C18色谱柱(5󰀁m,4󰀁6!150mm),甲醇-水(38:62)为流动相,流速1󰀁0ml/min,柱温

[作者简介]󰀁王晓燕(1974-),女,硕士,主管药师,主要从事药

品检验及标准研究工作。

*通讯联系人,E-mai:lhnyj1111@yahoo󰀁com󰀁cn

30∀,检测波长239nm。

1󰀁2󰀁2󰀁对照品溶液制备󰀁精密称取冬凌草甲素对照品8󰀁40mg置10ml量瓶中,加甲醇使溶解并定容至刻度,摇匀,备用。

1󰀁2󰀁3󰀁样品前处理

1󰀁2󰀁3󰀁1󰀁提取方法考察:取冬凌草茶粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50m,l密塞,称定重量,分别用索氏回流、水浴直接回流、超声(功率160W,频率40kHz)提取,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,测定,结果见表1。

表1󰀁提取方法的考察

提取方法含量(mg/g)

索氏(60min)

1󰀁423

回流(60min)

1󰀁461

超声(30min)

1󰀁463

表1结果显示,3种方法结果相差不大,由于超声方法操作简便、时间短,故采用本法。

1󰀁2󰀁3󰀁2󰀁提取溶媒的考察:依据冬凌草甲素的理化性质,分别选用甲醇、丙酮、乙酸乙酯为提取溶媒,超声处理30min,放冷,照上述方法测定,结果见表2。

表2󰀁提取溶媒的考察

提取溶媒含量(mg/g)

甲醇1󰀁463

丙酮1󰀁242

乙酸乙酯1󰀁121

表2结果显示,甲醇提取效果最好,故提取溶媒选定为甲醇。

1󰀁2󰀁3󰀁3󰀁超声时间的考察:取冬凌草茶粉末,以甲醇为提取溶媒,分别超声提取不同时间,照上述方法测定,结果见表3。

中国卫生检验杂志2010年8月第20卷第8期󰀁ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Aug2010;Vol20󰀁No8

表3󰀁超声时间的考察

超声时间(min)含量(mg/g)

201󰀁443

301󰀁463

401󰀁463

601󰀁461

1903

表3结果显示,提取30min时提取效果最好,冬凌草甲素已经基本提取完全。

1󰀁2󰀁4󰀁供试品溶液制备󰀁取冬凌草茶粉末(过四号筛)约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇50m,l称定重量,放置30min,超声处理(功率250W,频率40kHz)30min,放置至室温,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,先用滤纸滤过,再用0󰀁45󰀁m微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2󰀁6󰀁加样回收率试验

取清炒茶-1的样品粉末约0󰀁5g,精密称定,加入已知浓度的对照品溶液(0󰀁84mg/ml)1m,l然后精密加入甲醇49m,l照#2󰀁3∃项下方法自#称定重量∃开始制得加样回收供试品溶液,测定,计算得冬凌草甲素的平均回收率为95󰀁96%,RSD为1󰀁38%(n=6),结果见表4。

表4󰀁冬凌草茶中冬凌草甲素的加样回收率结果

样品含量对照品加入量(mg)(mg)0󰀁720󰀁710󰀁720󰀁720󰀁730󰀁72

0󰀁840󰀁840󰀁840󰀁840󰀁840󰀁84

测得量

(mg)1󰀁521󰀁531󰀁521󰀁521󰀁541󰀁52

回收率(%)95󰀁1498󰀁1995󰀁0195󰀁4896󰀁9695󰀁01

平均回收率

(%)95󰀁96

RSD(%)1󰀁38

2󰀁7󰀁样品测定

取市售不同工艺冬凌草茶各两批,按#2󰀁3∃项下方法制得供试品溶液,进样分析并计算四批冬凌草茶中冬凌草甲素含量,结果见表5。

表5󰀁冬凌草茶中冬凌草甲素含量测定结果(n=2)批号清炒茶-1清炒茶-1

A󰀁对照品HPLC色谱图;B󰀁样品HPLC色谱图;

1󰀁冬凌草甲素(oridonin)图1󰀁HPLC色谱图

清炒茶-2清炒茶-2烘干茶-1

含量(mg/g)

1󰀁461󰀁464󰀁314󰀁275󰀁355󰀁415󰀁915󰀁93

5󰀁925󰀁384󰀁29平均含量(mg/g)

1󰀁46

2󰀁结果

2󰀁1󰀁系统适用性试验

理论板数分别按冬凌草甲素峰计算,不低于3000;冬凌草甲素与其前峰的分离度R>1󰀁5;拖尾因子T均在0󰀁95~1󰀁05之间。

2󰀁2󰀁线性关系考察

精密吸取上述对照品溶液1ml置5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,得浓度为168󰀁g/ml的对照品溶液,分别吸取上述溶液各1󰀁、l2󰀁l、5󰀁l、7󰀁l、10󰀁l、15󰀁l、20󰀁l进样,在上述色谱条件下进行分析。以进样量(X)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲线并进行回归计算,得冬凌草甲素回归方程为:Y=1530󰀁8X+65631,r=0󰀁9998,冬凌草甲素在168󰀁g~3360󰀁g范围内呈良好线性关系。2󰀁3󰀁精密度试验

照#2󰀁3∃项下方法制得供试品溶液1份,连续进样6次,每次10󰀁,l根据冬凌草甲素峰面积计算6次进样的RSD值为2󰀁61%,表明方法精密度良好。2󰀁4󰀁稳定性试验

取上述供试品溶液,分别在0h、2h、4h、6h、8h、10h进样10󰀁,l根据冬凌草甲素的峰面积积分值,计算RSD值为2󰀁74%,结果表明冬凌草甲素在10h内稳定性良好。2󰀁5󰀁重复性试验

取清炒茶-1的样品粉末6份,照#2󰀁3∃项下方法制得供试品溶液,进样测定,根据峰面积积分值,计算此批冬凌草茶中冬凌草甲素的含量为1󰀁46mg/g,RSD为0󰀁79%。

烘干茶-1烘干茶-2烘干茶-2

3󰀁讨论

本实验色谱条件参照2010年版中国药典冬凌草含量测定方法及其他文献[2,3],根据实验情况调整了流动相比例及柱温,使冬凌草甲素色谱峰得到较好的分离效果。

比较含量测定结果发现,两种不同工艺所制冬凌草茶中冬凌草甲素含量差别较大,烘干茶中的冬凌草甲素含量较高,清炒茶中的冬凌草甲素含量较低,其中一批甚至低于起草标准中的含量最低限(2󰀁5mg/g)。这可能为清炒法冬凌草局部受热温度过高引起。且清炒法所制冬凌草茶不同批次间冬凌草甲素含量差别亦较大,说明该法所制冬凌草茶质量的均一性较差。[参考文献]

[1]袁珂,胡润淮,翟剑波,等󰀁正交试验法优选冬凌草的提取工艺

[J]󰀁中国现代应用药学杂志,1998,15(5):14󰀁

[2]国家药典委员会󰀁中国药典[M]󰀁一部󰀁北京:中国医药科技出

版社,2010:106-107󰀁

[3]靖慧军,陈随清,冯卫生,等󰀁冬凌草不同部位迷迭香酸及冬凌

草甲素的含量测定[J]󰀁中药材,2004,27(6):413-414󰀁

(收稿日期:2010-04-23)